新生鼠缺氧缺血性脑损伤时细胞外信号相关蛋白激酶路径与HIF-1α及其靶基因表达的调节
目的：探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子la(hypoxiainducible factor la，HIF-1a)蛋白及其靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达及细胞外信号相关蛋白激酶(Erk1/2)信号通路的激活，推测Erk1/2信号通路与神经元HIF-1a及VEGF表达调节的关系，以期更确切地阐明Erk1/2在发育期脑缺氧缺血性损伤(hypoxia ischemia brain damage，HIBD)时神经元HIF-1a及其靶基因表达中的作用。 方法：10 d龄SD大鼠72只，分为缺氧缺血组(n=32)、U0126干预组(n=4)、溶剂(DMSO+PBS)干预组(n=4)和假手术组(n=32)。缺氧缺血组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉分离并结扎，氮氧混合气(92％氮气、8％氧气)缺氧2.5 h，即为HIBD模型；U0126干预组和溶剂干预组分别在麻醉状态下于右侧侧脑室内注射U0126和溶剂(DMSO+PBS)，30 min后做缺氧缺血处理，方法同HIBD模型制作；假手术组只分离右侧颈总动脉，不结扎，不做缺氧处理。缺氧缺血组和假手术组每组分别按缺氧缺血后2、4、8及24 h 4个时间点处死动物取脑组织，U0126干预组和溶剂(DMSO+PBS)干预组于缺氧缺血后4 h取脑组织。应用免疫组织化学法检测HIF-1a、VEGF、Erk1/2和p-Erk1/2蛋白的分布和表达，Western blot定量检测HIF-1a、VEGF、Erk1/2及P-Erk1/2蛋白含量，RT-PCR检测HIF-1amRNA表达。 结果：缺氧缺血组HIF-1a蛋白表达在术后4 h明显升高，8 h达高峰，24 h后下降；VEGF与HIF-1a有相同的变化趋势。P—Erk1/2蛋白于术后4 h明显升高，8 h后下降，24 h达到基线水平。假手术组各时间点HIF-1a、VEGF和p-Erk1/2均有极少量弱阳性表达。缺氧缺血组HIF-1a和VEGF蛋白表达明显高于假手术组，差异有统计学意义(p<0.01)；缺氧缺血组p-Erk1/2于4h和8 h明显高于假手术组，差异有统计学意义(P<0.01)。Erk1/2蛋白表达随术后时间的延长没有明显变化，与假手术组比较无显著性差异(p>0.05)。应用Erk1/2特异性抑制剂U0126干预后，发现HIF-1a和VEGF蛋白的表达明显下降，与未应用抑制剂组比较差异有统计学意义(P<0.01)。而HIF-1a mRNA的表达无明显变化，与未应用抑制剂组比较差异无统计学意义(p>0.05)。 结论：发育期HIBD时，可激活Erk1/2信号通路，并诱导HIF-1a蛋白及靶基因VEGF蛋白表达增加，Erk1/2在发育期HIBD时神经元HIF-1a表达中起重要的调节作用，此调节作用发生在蛋白水平，并不影响HIF-1a mRNA的表达水平。
缺氧缺血性脑损伤 HIF-1α VEGF表达 Erk1信号通路 靶基因 调节机制
熊英 李丽华 屈艺 毛萌 母得志
四川大学华西第二医院儿科 610041
国内会议
济南
中文
1252-1258
2008-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）