叶酸对斑马鱼胚胎心脏发育影响的实验研究
目的：构建叶酸缺乏的斑马鱼模型，初步探讨叶酸缺乏导致心脏发育异常的机理，并探寻预防叶酸缺乏导致心脏发育异常的最佳补充叶酸时期。 方法：利用二氢叶酸还原酶抑制剂甲氨蝶呤(MTX)阻断二氢叶酸还原酶生物学作用以及采用向斑马鱼受精卵显微注射吗啡啉修饰反义核苷酸使二氢叶酸还原酶基因(dhfr)knock-down的两种方法构建叶酸缺乏的斑马鱼模型。在各叶酸缺乏组胚胎发育的不同阶段给予外源性叶酸后，与各叶酸缺乏组胚胎的心脏发育状况进行比较。在显微镜下观察各组胚胎的心脏发育异常百分比、心率、心室收缩指数(VSF)、心脏形态发育以及利用荧光显微造影的方法探查心脏流出道发育情浼。采用原位杂交和Real-time PCR的方法检测各组胚胎体内tbx5及nppa的表达情况。利用TUNEL法检测各组胚胎心脏的凋亡情况。 结果：叶酸缺乏组胚胎有明显的心脏形态发育异常、心率和VSF下降以及心脏流出道发育畸形。在受精后8-12小时给予外源性叶酸后的叶酸缺乏组胚胎心脏发育异常百分比降低显著，心脏形态发育和心脏流出道发育情况明显改善，心率和VSF不同程度的增加。叶酸缺乏组胚胎中的tbx5及nppa表达水平明显下降，心脏凋亡增加。给予外源性叶酸后，叶酸缺乏组胚胎tbx5和nppa的表达水平有所上升，心脏凋亡减少。 结论：在胚胎发育早期中段给予补充适量的叶酸可以最佳预防叶酸缺乏导致的心脏发育异常。叶酸缺乏导致胚胎心脏发育异常与tbx5和nppa的表达水平下调以及心脏凋亡增加有关。
叶酸缺乏症 胚胎 心脏形态 发育异常 心脏凋亡
孙淑娜 桂永浩 蒋璆 宋后燕 钟涛
复旦大学儿科医院 200032 复旦大学分子医学教育部重点实验室 200032 复旦大学分子医学教育部重点实验室 200032;美国Vanderbilt大学医学院细胞生物学实验室
国内会议
济南
中文
435-442
2008-07-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）