五龙鹅热休克蛋白70的表达提纯及其结合抗原肽形成复合物的特性研究
目的:为研究HSP70在热应激时的特异性表达、组织中HSPT0的分离纯化及其结合抗原肽形成复合物的特性,设计此试验； 方法:选取6w健康五龙鹅60只随机分为3组,对照组鹅不经热处理,试验1组鹅进行1次42±1℃、5h的急性热处理后立即宰杀,试验2组鹅经热处理后在正常饲养条件下恢复12h后宰杀.取心脏,常规石蜡切片做免疫组化试验:肝脏用于提纯HSPT0.比较3组鹅心脏HSPT0表达的差异,同时对试验组肝脏中的HSP70进行分离纯化,并进行鉴定.纯化后的HSPT0和人工合成的乙肝病毒前S1多肽相结合形成复合物,以双特异抗体夹心法检测其复合物的形成； 结果:研究结果表明:热应激状态下心肌纤维中有广泛的HSP70阳性颗粒,试验组1中HSP70表达重点部位在核膜及其周围,阳性细胞率为76.0％；而试验组2中鹅心肌HSPT0表达重点转移到胞膜周围,阳性细胞率为88.4％；通过两套纯化方案纯化蛋白均可得到HSPT0纯化物,蛋白纯度分剐为85％和95％,蛋白得率分别为0.115mg/g和0.157mg/g；合成肽在一定条件下和HSPT0纯化物形成复合物,经双特异性抗体夹心法检测复合物的形成,检测结果为阳性,复合物效价为1:81,说明实验中有复合物的形成； 结论:热应激时HSPT0的特异性表达重点在不同时间段有所转移,暗示HSPT0在细胞保护中可能行使一定的功能；在低压层析条件下可以得到高纯度的HSP70蛋白,相比较而言,分子筛初步分离、ConA琼脂糖层析和ADP琼脂糖层析这一流程的纯化效果更好；在体外一定条件下,人工合成肽可以和HSPT0相结合形成复合物,这将为进一步证明复合物的免疫作用提供试验基础.
热应激 病毒复合物 热休克蛋白 抗原肽 双特异抗体夹心法 纯化效果
吴晓平 王宝维 张旭晖 贾晓晖 张名爱 龙芳羽 杨志刚 王雷
青岛农业大学优质水禽研究所,青岛,266109
国内会议
中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
广州
中文
445-450
2008-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）