鸡基因工程重组复合抗病毒制剂研究
为了研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,本研究采用SOE-PCR构建鸡ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并进行原核表达.通过自行创新的蛋白纯化方法对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。分别检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抗病毒活性、促鸡T淋巴细胞增殖活性以检测其在细胞上活性；检测与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性以检测其免疫学活性；测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内抗不同病毒活性；测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内的抗病毒活性和免疫增强活性.结果表明:成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因.表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9 kDa,纯化后融合蛋白纯度在96％以上.rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单-rChIFN-α的抗病毒活性；最低剂量为250pg的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可对鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,增殖活性随剂量的增加逐渐增强.rChIFN-α-linker-ChIl-2蛋白在体外可和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应.干扰素活性单位为100 IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显减轻NDV和AIV H9N2毒株所引起的胚体出血程度,并能显著延长鸡胚存活时间.rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白对NDV灭活疫苗具有显著的免疫增强作用,但对NDV活疫苗具有免疫抑制作用.本研究表明rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒应用研究奠定了基础.
基因工程 鸡 α干扰素 白细胞介素2 融合表达 抗病毒制剂 细胞增殖 抗病毒活性 免疫学活性
闫若潜 谢彩华 张志凌 刘梅芬 盛敏 吴志明
河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,450008 河南省动物疫病预防控制中心,河南郑州,50008
国内会议
中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
广州
中文
304-307
2008-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）