鸡IFN-α,-β,-γ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

摘要：

根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α,-β,-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参,采用SYBR GreenI染料建立实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法. 首先将IFN-α,-β,-γ,克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,鸡IFN-α,-β,-γ和GAPDH的Ct值与标准品稀释度在1×102～1×103拷贝/μL范围,分别呈良好的线性关系,r2均大于0.99.熔解曲线分析结果表明产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h.本试验建立的鸡IFN-α,-β,-γ基因实时荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础.

关键词： γ干扰素 基因序列 磷酸甘油脱氢酶 荧光定量 特异引物

作者: 张贺楠 赖汉漳 齐岩 孔留五 张小桃 曹伟胜 廖明

作者单位: 华南农业大学兽医学院,广东广州,510642

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

会议地点: 广州

会议语种:中文

页码: 296-299

在线出版日期: 2008-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）