猪瘟病毒RT-LAMP快速诊断方法的建立

摘要：

针对CSFV的保守区设计并筛选出一套RT-LAMP引物,以石门株为标准毒株,采用梯度稀释法对各反应要素进行优化。最终确定CSFV RT-LAMP的反应体系为:4mM镁离子浓度,0.8 M甜菜碱,1.4 mM dNTP mix,8 U Bst DNA大片段聚合酶,2 U AMV反转录酶,5 pM F3,5 pM B3,50 pM FIP,50pM BIP,25 pM LF,25 pM LB,1×Thermo butter,μl RNA；反应条件为63℃45min；80℃ 10min.RT-LAMP反应可在普通水浴锅或恒温箱里完成,产物经琼脂糖凝胶电泳可见大小片段不等的斑马纹样条带；反应同时产生大量白色副产物,混浊可辨,离心后沉于管底形成白色沉淀物.特异性试验及酶切鉴定证明该方法具有很好的特异性.灵敏度试验显示该方法的灵敏度比常规RT-PCR高两个数量级.

关键词： 快速诊断 猪瘟病毒 梯度稀释法 特异性试验 酶切鉴定

作者: 陈蕾 范学政 王琴 徐璐 赵启祖

作者单位: 中国兽医药品监察所猪瘟参考实验室,北京,10081

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

会议地点: 广州

会议语种:中文

页码: 209-213

在线出版日期: 2008-11-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）