多重聚合酶链反应快速检测嗜水气单胞菌和爱德华菌
嗜水气单胞菌是一种典型的人-兽-鱼共患病病原，嗜水气单胞菌、爱德华氏菌的病原分离鉴定、血清学检测方法等，都无法快速鉴别嗜水气单胞菌、爱德华氏菌，不能适应规模化养殖的需要，因此应用特异、快速、敏感的聚合酶链反应式(PCR)检测嗜水气单胞菌、爱德华菌技术就显得非常重要。 本研究根据嗜水气单胞菌株和爱德华菌株16S rDNA基因的结构特点，设计合成了二对引物XZAH3、XZAH4和：XZE7b、XZE8，以嗜水气单胞菌株和爱得华氏菌株培养物抽提的DNA为模板，对PCR各循环参数和各引物浓度等进行优化，以确定最佳的PCR反应条件，将已提取的嗜水气单胞菌株和爱德华菌株的DNA以及其它鱼类病原菌(毒)株的DNA分别加入到所建立的多重PCR反应体系中进行扩增，检测其特异性，测定嗜水气单胞菌株和爱德华菌株模板的DNA含量后，按10倍递增稀释，同时加入到最佳的多重PCR反应体系中进行扩增，检测其敏感性。试验最后确定多重PCR中二对引物的最佳工作浓度是XZAH3、XZAH4为500ng和XZE7b、XZE8为1500ng，多重PCR的最佳反应模式为94℃变性5min，然后进入94℃变性1min，54℃退火1min。72℃延伸lmin的循环，共进行35个循环，最后再经72℃延伸10min后，于4℃结束反应；应用该程序对嗜水气单胞菌株、爱德华菌株核酸和其它鱼类病原菌毒株核酸分别进行多重PCR扩增，结果嗜水气单胞菌株只扩增出361bp一条带，而爱德华菌株只扩增出576bp一条带，而对其它鱼类病原菌核酸的PCR扩增，均未出现任何扩增条带，经过敏感性测定，多重PCR最低能检出10pg嗜水气单胞菌株、爱德华菌株DNA模板。
水产养殖 病原细菌 菌株鉴定 基因表达 嗜水气单胞菌 爱德华菌
邓显文 谢芝勋 谢志勤 刘加波 庞耀珊 谢丽基
广西兽医研究所 南宁 530001
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288-291
2008-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）