奶牛成骨细胞的体外培养及鉴定

摘要：

取新生奶牛肋骨，剪成lmm3大小骨片，胰蛋白酶消化5次，D-Hank”s彻底冲洗后，骨片置于含15％FBS的DMEM中培养，获取单层细胞。倒置显微镜下观察细胞形态，改良钙-钴法染色碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)，比色法检测ALP活性，RT-PCR检测骨钙素(osteocalcin，OC) mRNA，放射免疫法检测骨钙素蛋白及茜素红染色观察细胞钙化结节，对所获得细胞进行鉴定。结果显示，采用本法所获得的细胞具有典型的成骨细胞形态和特性：钙-钴法染色ALP呈阳性：培养7d后可检测到OC mRNA表达，12d后细胞上清液中可检测到OC蛋白；诱导培养2w细胞基质可见钙化结节形成。提示采用胰蛋白酶消化，组织块移行法所培养的细胞具有成骨细胞特性，本方法可获得高纯度、高活性的奶牛成骨细胞。

关键词： 成骨细胞 细胞培养 奶牛 体外培养

作者: 李素华 郭定宗 尹红斌 黎兵 杨世锦

作者单位: 西南林学院保护生物学学院，昆明 650224,华中农业大学动物营养代谢病与畜产品品质调控研究中心，武汉 430070 华中农业大学动物营养代谢病与畜产品品质调控研究中心，武汉 430070 华中农业大学动物营养代谢病与畜产品品质调控研究中心，武汉 430070,深圳出入境检验检疫局，深圳 518045

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第一届中国兽医临床大会

会议地点: 广州

会议语种:中文

页码: 382-386

在线出版日期: 2008-11-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）