手工克隆法高产奶牛克隆技术研究
利用显微注射的方法进行体细胞核移植是目前最常用的一种动物克隆方法,但是由于设备和技术要求比较高、去除的胞质量大、融合率较低，从而降低了核移植的整体效率。近年来有人使用特制的切割刀进行完整受体卵母细胞分割,然后选择无核的两个半卵和供体细胞进行克隆胚胎重构即提出所谓的手工克隆法(HMC)。该方法具有操作相对简单,而且无需昂贵的显微操作系统，细胞融合率较高等特点，是克隆技术的有效手段之一。本实验利用化学诱导去核法联合手工克隆进行了高产奶牛克隆关键环节优化，实验结果显示，利用0.4ug/mL Demecolcine对成熟22h的受体卵母细胞分别诱导处理Omin(对照组)、30min、60min、90min后，经7.5ug/mL Hoclaest33342染色证实双凸(含染色质)的诱导去核率分别为9.4％、29.5％、84.2％、80.0％;两种不同蛋白源SOFaaci-BSA和SOFaaci-FCS发育液对手工克隆胚胎的发育差异显著,囊胚发育率分别为31.08％、18.87％;手工克隆鲜胚和冷冻胚胎进行同期受体移植,A级鲜胚15枚移植同期受体母牛6头，头均2.5枚，A级或A+B级冷冻克隆胚胎31枚，移植受体7头，头均利用冻胚4.5枚,孕检结果表明,移植后第180d的受胎率分别为50.0％、28.6％，鲜胚移植的效果明显高于冻胚的受胎率;妊娠期最长的543＃妊期7月龄流产。
手工克隆 奶牛 显微注射 体细胞核移植
孙伟 吴冬生 王建国 钱松晋 周文忠 李喜和
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2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）