基于16sRNA的双重荧光定量PCR检测双歧杆菌和芽孢杆菌方法的建立及初步应用

摘要：

目的:建立一种能同时检测双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法. 方法:通过对双歧杆菌和芽孢杆菌的引物、探针的浓度、Mg2+浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,并作了特异性、敏感性和重复性实验,建立了可同时检测临床标本中双歧杆菌和芽孢杆菌的双重荧光定量PCR方法. 结果:该方法在两菌DNA含量为108～104copies有较好的线性关系;检测两菌标准品DNA模板最少检测到的细菌数分别为9 CFU/mL和6 CFU/mL;特异性试验表明该检测方法只对双歧杆菌和芽孢杆菌基因组呈阳性反应.分别用该技术和单重荧光定量PCR检测25份来自雏鸭的十二指肠、空肠、回肠、盲肠和直肠,结果显示两种方法对样品的检测符合率100％. 结论:本研究建立的双重荧光定量PCR方法可同时定量检测临床标本中双歧杆菌和芽孢杆菌,该法比单重荧光定量PCR更方便、快速准确.

关键词： 双歧杆菌 芽孢杆菌 双重实时荧光PCR 同时定量检测

作者: 尹念春 罗启慧 陈孝跃 程安春 汪铭书 曹省艳 邓树轩 曹平 张振华 颜彬 朱德康

作者单位: 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,四川 雅安,625014 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,四川 雅安,625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川 雅安,625014 四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心,四川 雅安,625014 动物疫病与人类健康四川省重点实验室,四川 雅安,625014 四川农业大学动物微生态工程研究中心,四川 雅安 625014

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛

会议地点: 河南新乡

会议语种:中文

页码: 440-446

在线出版日期: 2008-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）