会议专题

杂色鲍肝脏不同免疫时相全长cDNA文库的构建

采用RDP试剂提取杂色鲍Haliotis diversicolor不同免疫时相肝脏的总RNA,经olgotex试剂盒纯化得到mRNA。根据SMARTswitching mechanism at 5”end of RNA transcript原理,利用含sfiIB酶切位点的oligodT引物合成cDNA第一条链,利用含SfiIA酶切位点的SMARTⅢ寡核苷酸核苷酸作为cDNA第一条链在mRNA5’端延伸出去的模板,采用LD-PCR引物合成双链cDNA。双链cDNA用sfi I酶切和过柱分级分离后,与λTripEx2两臂进行连接,随后进行λ噬茵体体外包装反应,构建成杂色鲍不同免疫时相12h和24h全长cDNA文库。构建好的文库分别含有约5.04×106和2.95×106个重组子。插入cDNA长度分布在500bp-3kb左右,说明文库具有良好的质量,为进一步筛选、克隆杂色鲍免疫调控基因奠定了基础。

杂色鲍 cDNA文库 免疫时相 免疫调控 寡核苷酸核苷酸

王艺磊 张子平 戴军 邹志华 王淑红

集美大学水产学院,水产生物技术研究所,福建厦门 361021 美国密歇根州立大学水产与野生生物系,美国密歇根

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2003-07-25(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)