斜带石斑鱼哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要：

应用聚合酶链反应PCR方法，从患病石斑鱼分离到的哈维氏弧菌基因组中扩增获得一个约800bp的外膜蛋白基因，将其克隆到pGEM-T Easy载体，序列分析表明：该基因含有一个801bp的开放读码框ORF，编码266个氨基酸，推算分子量为28.112 kDa。用PCR方法对此基因进行改造后，定向克隆至原核表达载体pBV220，构建重组哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK基因表达载体pBVOmpK，并在大肠杆菌中获得高效表达，表达目的蛋白占细菌总蛋白的24.8％。蛋白经纯化后，免疫新西兰大白兔制备抗血清，经Westem－blotting分析表明，重组蛋白与从哈维氏弧菌中提取的外膜蛋白具有相同的免疫原性。

关键词： 斜带石斑鱼 哈维氏弧菌 外膜蛋白 原核表达 免疫印迹 基因克隆 大肠杆菌

作者: 李宁求 白俊杰 劳海华 叶星 简清 石存斌 吴淑勤

作者单位: 中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州 510380;上海水产大学渔业学院,上海200090 中国水产科学研究院珠江水产研究所,广东广州 510380

会议类型: 国内会议

会议名称: 第一届海洋生物高技术论坛

会议地点: 浙江舟山

会议语种:中文

页码: 756-761

在线出版日期: 2003-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）