真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的体外重组与纯化的研究
将真鲷肿瘤坏死因子TNFα基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并在大肠杆菌XL1-blue中进行转化；转化子用载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因结构正确，且准确插入到表达载体启动子的下游，获得了结构和组成正确的重组子。重组子经IPTG诱导后，以SDS-PAGE电泳鉴定，电泳结果表明，该基因在大肠杆菌xL1-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整，重组蛋白在体外获得了高效表达，高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％～30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示，随诱导时间的增加，重组蛋白产量逐渐增高，经4h诱导，其表达量可以达到平台期，过长时间的诱导，对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法，用Sephadex G150，对重组蛋白进行脱盐复性，使重组蛋白得到了进一步纯化。
真鲷 肿瘤坏死因子 重组蛋白 基因重组
蔡中华 宋林生 高春萍 邱丽华 相建海
中国科学院海洋研究所,山东青岛266070;天津农学院,天津300384 中国科学院海洋研究所,山东青岛266070 中国海洋大学,山东青岛266003
国内会议
浙江舟山
中文
749-755
2003-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）