氧化型低密度脂蛋白致PC12细胞的毒性作用
目的：探讨oxLDL致PC12细胞的毒性作用及其机制。 方法：本研究采用密度梯度离心法分离LDL，Cu2+诱导法制备ox”,DL。将oxLDL及LDL，设下列浓度组：O g/ml(空白对照组)、5 g，ml、7.5 g，ml、10 g，ml、12.5 g，ml、15 g/ml、20 g，ml。以PC12细胞作为神经细胞模型，用不同浓度oxLDL，处理细胞相应时间。通过透射电镜观察细胞形态的改变；通过MTT实验、LDH释放实验、TLJNEL，实验及Caspase-3测定来观察oxLDL对细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及Caspase-3活性的影响。统计方法：用t检验、单因素及双因素方差分析对数据进行统计学处理。 结果：1.经LDL提取及氧化所得的oxLDL，的MDA含量为27nmol/mg，电泳迁移率为3.0，符合完全氧化LDL的标准。2.透射电镜：从7.5 g，ml的oxLDL组开始细胞形态有改变，一部分细胞呈现坏死表现，小部分细胞呈现凋亡表现。随着oxLDL浓度增加，坏死细胞增加明显，至20 g/ml时，主要为坏死细胞。3.MTT实验：从oxLDr，5咖l组(作用时间24h)及16h(OxLDL 10 g/ml组)开始，细胞存活率随着浓度及时间增加而下降，与相应浓度组的LDL组相比均有显著差异。LDL各浓度组与正常对照组相比无显著差异。4.LDH释放实验：从oxLDL7.5g/ml组开始，LDH释放率随着浓度增高而增高，与相应浓度LDL组相比有显著差异。LDL各浓度组与正常对照组相比无显著差异。5.TUNEL 实验：从oxLDL7.5 g/ml组开始，TUNEL，阳性细胞数随着浓度增高而增高，与正常对照组及LDL组相比有非常显著差异；20 g/ml组时，TUNEL阳性细胞数下降。6.Caspase-3活性测定：从oxLDL 5 g/ml组开始，12h及24h的Caspase-3活性随着浓度增高而增高，至20 g/ml时开始下降，与正常对照组及LDL，组相比有非常显著差异。4h时酶活性没有改变，12h时最高，24h时下降。 结论：1.OxLDL 致PC12细胞的毒性作用，主要以坏死细胞为主伴少量凋亡细胞；高浓度时，几乎是坏死作用。坏死细胞表现为电镜下形态改变及LDH释放率的增加；凋亡细胞电镜下形态改变、TUNEL阳性细胞率增加及Caspase-3酶活性的升高。2.oxLDL，致PC12细胞的毒性作用呈剂效与时效关系，而LDL，无细胞毒性作用。3.oxLDL致PC12细胞死亡通过Caspase-3途径。oxLDL与Caspase-3活性呈剂效和时效关系。
神经系统疾病 PC12细胞 低密度脂蛋白 细胞毒性
曹莉 尹鸿操 周礼 王拥军
北京安贞医院神经内科, 100029 中国医学科学院基础医学研究所病理室 北京天坛医院神经内科
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86-92
2003-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）