cDNA文库建立与ESTs测序分析：一个发现和鉴定茶树功能基因的高效快速新途径
本文以Trizol-步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA，分离纯化富含PolyA的mRNA，反转录合成双链cDNA，以λTripEX2为载体，构建了龙井43新梢cDNA文库。原始文库的滴度为6.8×105pfu，ml，总克隆数为3.5×105个，重组率为98.05％，扩增后文库总滴度为7.2×109pfu/ml。对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，表明插入片段大多分布在0.5-2.0kb之间，绝大部分在1.0-1.5kb左右。文库质量鉴定结果表明，构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明，获得有用序列2963个，测序成功率为68.5％，其中空载和去除载体后序列短于150bp有416个，重的有863个，重复率为33.88％，首批共获得1684个茶树EsTs。绝大部分ESTs的长度在300-700bp之间，通过与NCBI等基因数据库比对、查询和注释，获得已知功能基因或具推测功能基因607个，新基因1077个，证明ESTs测序分析是一个发现和鉴定茶树功能基因的高效快速新途径。最后讨论了ESTs的优点和用途。
龙井茶树 茶树种植 遗传育种 基因文库
陈亮 赵丽萍 高其康
中国农业科学院茶叶研究所,杭州 31O008 浙江大学分析测试中心,杭州 310029
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2003-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）