肺癌相关基因HLCDGl蛋白的亚细胞定位和转基因肺癌细胞系建立及凋亡机制初步研究
HLCDGl基因是与肺癌相关的候选抑瘤基因。为探讨其作用机制,将HLCDGl基因编码区cDNA插入pcDNA3.1(+)质粒中,构建了pcDNA3.1(+)／HLCDGl真核表达重组质粒。通过脂质体转染技术,将重组质粒导入HLCDGl表达下调的肺癌细胞系A549。RT-PCR验证了转染HLCDGl基因的A549肺癌细胞HLCDGl基因mRNA表达增加,建立了转基因HLCDGl肺癌A549细胞系。电镜观察发现,转基因组肺癌细胞出现细胞凋亡,进一步结合流式细胞仪及Western Blot方法,分析HLCDGl转染组、空栽体转染组和未转染组细胞凋亡率及凋亡效应子caspase-3蛋白表达。HLCDGl转染组细胞凋亡率及caspase-3蛋白表达水平分别比空戢体转染组和未转染组明显增高(P<O.05)。结果提示,HLCDGl基因可诱导肺癌细胞凋亡。构建了pEGFP-C1／HLCDGl融合蛋白表达载体,转染COS7细胞,在荧光显微镜下,观察到胞浆中有成团的绿色荧光,这提示HLCDGl基因缟码的蛋白主要定位在胞浆。本实验结果为下一步研究HLCDGl基因的生物学特性和功能奠定了重要的实验依据。
肺癌 HLCDGl基因 细胞凋亡
谢海龙 邹飞雁 陈主初
中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙 410078 南京大学临床学院,南京 210002 中南大学湘雅医学院肿瘤研究所,长沙 410078
国内会议
长沙
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226-231
2003-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）