外科监护室亚胺培南耐药铜绿假单胞菌外膜蛋白和β-内酰胺酶研究
铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)是院内感染重要条件致病菌之一,外科重症监护室是院内感染重灾区,为探讨铜绿假单胞菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素耐药机制,选择2001年7月至2004年7月,北京大学第一医院外科监护室各种临床标本中分离的49株非重复Pa,用琼脂稀释法测定抗生素最小抑菌浓度;提取β-内酰胺酶进行三维水解试验及等电聚焦电泳;紫外分光光度计测定酶活性;用PCR扩增IMP、VIM金属酶基因;用Western-blot分析外膜蛋白0prD<,2>表达水平。结果发现受检49株Pa均对4种或4种以上抗生素耐药,表现为多重耐药,将Pa对亚胺培南MIC≥8μg/mL,归为耐药组,MIC≤4μg/mL归为敏感组,则8株对亚胺培南敏感,41株对亚胺培南耐药。耐药组34株菌产AmpC酶,其中8株同时产ESBLs酶,2株单一产ESBLs,未筛选出产金属酶菌株;以参照菌PaO1酶活性(0.043umol/min.mg)为参考,耐药组除Pa8、Pa10、pa40、Pa414株菌菌酶活性在PaO1的5倍以下,其余菌株酶活性均在PaO1的10倍以上;敏感组酶活性除Pa42外,酶活性均是PaO1的5倍以下,亚胺培南耐药组酶活性(74.32±53.42)与亚胺培南敏感组酶活性(8.7±16.16)比较差异有统计学意义(P=0.001<0.01);等电点从5.4~9.3不等。为使各菌株间外膜蛋白具有可比性,外膜孔蛋白OprD<,2>的表达水平以各菌株整合密度值(IDV)与参照菌PaO1相对应值的比表示,比值<1.0为OprD<,2>低表达株,>1.0为正常表达株,缺失株OprD<,2>值以0表示。发现对亚胺培南敏感组均正常表达OprD<,2>,耐药组OprD<,2>表达均降低或缺失(23株OprD<,2>缺失,18株降低)。OprD<,2>相对表达量(0.20±0.27)与敏感组(3.10±2.20)比较差异有统计学意义(P=0.000<0.01);未扩增出IMP、VIM金属酶基因。由此可见外膜蛋白OprD<,2>表达降低或缺失以及高活性AmpC酶是本院外科监护室铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因,与IMP、VIM金属酶关系不大。
铜绿假单胞菌 亚胺培南 外膜蛋白 β-内酰胺酶 院内感染
衣美英 李春英 王鹏远 刘玉村
中日友好医院检验科细菌室,北京 10029 北京大学第一医院普外科,北京 10034
国内会议
第七次全国临床微生物学术年会暨第三届两岸三地临床微生物与感染病学术论坛
成都
中文
483-486
2007-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）