Smad4基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

摘要：

目的:构建Smad4基因RNAi慢病毒载体。方法:针对已经筛选确定的Smad4基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经MluⅠ和Cla酶切后的pLVTHM载体(含H1启动子和绿色荧光蛋白(GFP))连接产生LV-shSmad4慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV-shSmad4, pCMV-dR8.74和pMD2G三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生慢病毒,以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果: PCR和测序证实,成功构建Smad4shRNA的慢病毒载体LV-shSmad4。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为5×10<”10>pfu/L。结论:成功构建人Smad4基因RNAi慢病毒载体。

关键词： Smad4基因 pLVTHM载体 慢病毒载体 肿瘤抑制基因 RNAi靶序列

作者: 季国忠 张发明 翟惠虹 范志宁 樊代明 王学浩

作者单位: 南京医科大学第二附属医院消化医学中心 江苏南京 210011 南京医科大学第二附属医院消化医学中心 江苏南京 210011 第四军医大学西京医院消化研究所 陕西西安 710033 第四军医大学西京医院消化研究所 陕西西安 710033 南京医科大学第一附属医院肝胆外科 江苏南京 210029

会议类型: 国内会议

会议名称: 第五届全国内镜外科研讨会

会议地点: 南京

会议语种:中文

页码: 113-115

在线出版日期: 2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）