载体法筛选人巨细胞病毒UL54基因小干扰RNA靶位筛选体系的建立
目的：建立载体法筛选人巨细胞病毒UL54基因小干扰RNA靶位的体系。 方法：利用质粒pAVU6+27，设计并构建6个shRNA表达载体(psiUL54-1～6)，与融合蛋白表达载体pUL54S1-EGFP、pUL54S2-EGFP共转染AD293细胞，荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况，RT-PCR法分析UL54S1/UL54S2基因mRNA水平的变化，并通过流式细胞仪评价siRNA对融合蛋白的抑制作用，采用方差分析对流式细胞检测结果进行统计分析，筛选出有效的siRNA作用靶位。 结果：shRNA表达载体psiUL54-3与融合蛋白表达载体pUL54S1-EGFP共转染AD293细胞48h后能下调UL54S1基因mRNA水平，抑制融合蛋白UL54S1-EGFP的表达(P<0.01)，psiUL54-2与融合蛋白表达载体pUL54S1-EGFP共转染AD293细胞48h对融合蛋白UL54S1-EGFP的表达无影响(P>0.05)；shRNA表达载体psiUL54-4～6与融合蛋白表达载体pUL54S2-EGFP共转染AD293细胞48h后对融合蛋白UL54S2-EGFP的表达无影响(F=1.76，P>0.05)。 结论：成功建立载体法筛选人巨细胞病毒UL54基因小干扰RNA靶位的体系，UL54基因序列中1532-1550位点是有效的siRNA靶位点。
人巨细胞病毒 UL54基因 小干扰RNA 靶位筛选体系
胡妙凤 陶然 段群军 尚世强
浙江大学医学院附属儿童医院中心实验室,310003
国内会议
浙江舟山
中文
2007-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）