EB病毒LMP2 B细胞表位融合蛋白免疫特性的初步研究
目的：对EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2(LMP2)的B细胞表位进行预测，并对其融合蛋白的免疫原性和抗原性及其在鼻咽癌(NPC)血清学诊断中的应用价值进行了初步探讨。 方法：以EBV标准株(B95.8)LMP2的完整氨基酸序列为基础，采用SOPMA、GOR、nnPredict和HNN 4种方法分别预测LMP2的二级结构；并结合其跨膜区域、亲水性、表面可及性、抗原性、极性和柔韧性等参数综合分析，预测EBV-LMP2的B细胞表位。选择B细胞表位基因，按原核表达系统偏爱密码子优化，采用基因工程方法将其分别克隆至原核表达载体pET32a(+)中，诱导表达、鉴定和纯化表位融合蛋白，检测其诱导小鼠产生的特异性IgG抗体；并选择免疫原性强的融合蛋白作包被抗原，用间接酶联免疫吸附实验(ELISA)检测NPC组、尖锐湿疣(CA)疾病对照组和健康对照组的血清特异性抗体。 结果：经预测分析，EBV-LMP2的B细胞表位可能位于其N端199～209、318～322和381～391区段。选择这3个B细胞表位肽段基因，构建的重组质粒在原核表达系统中均得到了高效表达，融合B细胞表位蛋白pET32a(+)/EBV-LMP2aa199~209、pET32a(+)/EBV-LMP2aa318~322和pET32a(+)/EBV-LMP2aa381~391分别命名为Ozlf67、Ozlf69和Ozlf71。3个融合蛋白分别免疫小鼠后，均可在小鼠血清中检测到高滴度的特异性IgG抗体，与空载体对照组比较均有显著性差异(P<0.01)，其中含N端199～209位的融合蛋白，即Ozlf67免疫原性最强。选用Ozlf67融合蛋白为诊断抗原，通过ELISA检测NPC组、CA疾病对照组及健康对照组血清特异性抗体，IgG抗体均值分别为：0.866±0.852、0.140±0.106和0.184±0.067；阳性率分别为72.3％(34/47)、5.8％(4/68)和0(0/68)；与对照组比较，NPC组血清IgG抗体均值及阳性率均有显著性差异(P<0.01)。 结论：EBV-LMP2的B细胞表位可能位于其N端199～209、318～322和381～391区段，B表位的原核融合蛋白pET32a(+)/EBV-LMP2aa199~209(Ozlf67)，具有较强的免疫原性和抗原性，用于NPC的血清学诊断试剂的研制具有临床应用价值。
鼻咽癌 血清学诊断 EB病毒 潜伏膜蛋白2 B细胞表位预测 融合蛋白 免疫特征
欧琴 张丽芳 朱珊丽 王鹏飞 陈韶 钟晓芝 李文姝
温州医学院 分子病毒与免疫研究所,微生物学与免疫学教研室,325053
国内会议
浙江舟山
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2007-05-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）