选择性剔除芍药苷对四逆散抑制迟发型超敏反应的影响
目的：探讨芍药苷在四逆散抑制迟发型超敏反应中的作用。 方法：制备针对芍药苷的免疫亲和柱成功从四逆散中选择性地剔除芍药苷。在体内动物实验中，以2，4，6-三硝基氯苯所致的小鼠接触性皮炎作为典型的迟发型超敏反应模型考察药物的作用。体外实验中，采用中性红吞噬试验和NO释放试验考察巨噬细胞的功能；采用RT-PCR和real-time PCR的方法考察细胞因子和炎症因子的表达水平；采用ELISA的方法检测细胞因子的分泌水平；采用western blot考察MAPK磷酸化和巨噬细胞游走抑制因子MIF的水平。 结果： 200 mg/kg的四逆散和20 mg/kg的芍药苷于PCl-CS的诱导相给药，可显著减轻耳肿胀，而芍药苷的剔除显著削弱了四逆散对耳肿胀的改善作用，同时部分地阻断了四逆散对炎症部位TNF-α，IL-1β，COX-2和iNOS mRNA水平的下调作用。四逆散全方和芍药苷在10μg/mL的浓度可显著下调LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β和COX-2的mRNA水平，而芍药苷的剔除阻断了四逆散的这种下调作用。在蛋白水平上，芍药苷的剔除削弱了四逆散对LPS刺激巨噬细胞分泌TNF-α的抑制作用；并且将芍药苷按不同比例回添至剔除样品，这种抑制效果也剂量依赖性的回复到甚至超过四逆散原方的水平。进一步，这一现象在巨噬细胞吞噬试验和NO释放试验中也得到相类似的结果。有意思的是，剔除芍药苷的四逆散可削弱全方对T淋巴细胞MIF表达的下调作用，而对巨噬细胞MIF的表达没有明显影响。 结论：从正反两方面(剔除和回添)说明了芍药苷是四逆散作用于迟发型超敏反应的活性成分之一，并阐明芍药苷主要通过影响巨噬细胞功能这一环节从而在四逆散全方中发挥抗炎的作用。
芍药苷 四逆散 选择性剔除 迟发型超敏反应 实验药理 巨噬细胞功能
孙洋 董懿 陈亮 陈婷 徐强
南京大学生命科学院医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 210093
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2007-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）