鹅热休克蛋白70的表达和提纯以及病毒复合物形成的研究
为研究HSP70在热应激时的特异性表达、组织中HSP70的分离纯化及其结合抗原肽形成复合物的特性,设计此试验；选取6周龄健康五龙鹅60只随机分为3组,对照组鹅不经热处理，试验1组鹅进行1次42士1℃、5h的急性热处理后立即宰杀,试验2组鹅经热处理后在正常饲养条件下恢复12h后宰杀。取心脏,常规石蜡切片做免疫组化试验；肝脏用于提纯HSP70。比较3组鹅心脏HSP70表达的差异,同时对试验组肝脏中的HSP70进行分离纯化,并进行鉴定。纯化后的HSP70和人工合成的乙肝病毒前S1多肽相结合形成复合物,以双特异抗体夹心法检测其复合物的形成；研究结果表明:热应激状态下心肌纤维中有广泛的HSP70阳性颗粒,试验组1中HSP70表达重点部位在核膜及其周围,阳性细胞率为76.0％；而试验组2中鹅心肌HSP70表达重点转移到胞膜周围,阳性细胞率为88.4％；通过两套纯化方案纯化蛋白均可得到HSP70纯化物,蛋白纯度分别为85％和95％,蛋白得率分别为0.115 mg/g和0.157 mg/g；合成肽在一定条件下和HSP70纯化物形成复合物,经双特异性抗体夹心法检测复合物的形成,检测结果为阳性,复合物效价为1:81,说明实验中有复合物的形成。热应激时HSP70的特异性表达重点在不同时间段有所转移,说明HSP70在细胞保护中行使一定的功能；相比较而言,分子筛初步分离、ConA琼脂糖层析和ADP琼脂糖层析这一流程的纯化效果更好；在体外一定条件下,人工合成肽可以和HSP70相结合形成复合物。
鹅 热休克蛋白70 蛋白表达 蛋白提纯 病毒复合物
吴晓平 王宝维 张旭晖 贾晓晖 张名爱 龙芳羽 杨志刚 王雷
青岛农业大学优质水禽研究所,山东青岛 266109
国内会议
郑州
中文
654-661
2007-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）