神经红蛋白突变体(V68S)的制备、表征和稳定性
神经红蛋白(Neuroglobin，NGB)是近期发现的血红素蛋白家族中的新成员(Fig. 1)。与血红蛋白和肌红蛋白不同,在没有外源配体存在时,它具有六配位形式(双组氨酸配位)的血红素结构。但到目前为止其具体的生物功能还不清楚。Va168距血红素远端轴向配体His64较近,在神经红蛋白发挥其生物功能时可能发挥着重要的作用。本文通过PCR介导的定点突变技术构建了神经红蛋白突变体V68S的基因,将带有此突变基因的pET3a质粒转入大肠杆菌E. ColiBL21(DE3)plys中得到成功表达,经分离纯化得到了电泳纯的突变蛋白V68S。利用电喷雾质谱、紫外可见吸收光谱、荧光光谱和圆二色光谱对其进行了表征,结果发现,V68S突变蛋白仍然具有六配位的血红素结构,定点突变对神经红蛋白整体结构影响不大,V68S对酸和热的稳定性实验结果表明,定点突变使得神经红蛋白的酸稳定性降低,热稳定性稍有降低。尿素、盐酸胍变性研究表明,盐酸胍的变性能力强于尿素,V68S在盐酸胍中可以变性完全。荧光相图显示,V68S盐酸胍变性符合”五态模型”:N→Ⅰ<,1><”GdnHcl>→Ⅰ<,2><”GdnHcl>→U→R,而在尿素中的变性则是”三态模型”:N→Ⅰ<”Urea>→U。
神经红蛋白 突变体 制备工艺 结构表征 稳定性
李连之 赵超
聊城大学化学化工学院 聊城 252059;南京大学配位化学国家重点实验室 南京 210093 聊城大学化学化工学院 聊城 252059
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2007-07-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）