人组织样品中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝数定量分析
目的:建立准确测定肿瘤组织中SNCG基因CpG岛甲基化拷贝的含量的方法. 方法:利用亚硫酸氢钠修饰-克隆测序法确定胃组织该CpG岛中关键性CpG位点,然后利用限制性内切酶建立了测定该位点甲基化状态的分析法(COBRA),再利用变性高效液相色谱技术进行定量。 结果:对2个肿瘤细胞系、2个正常人胃黏膜样品、2对原发性胃癌及其癌旁非癌组织进行分析发现,在该CpG岛的16个CpG位点中,-88位等5个CpG位点的甲基化状态与整个CpG岛的甲基化状态一致;利用限制性内切酶Acil能够区分该位点甲基化状态:在该位点未甲基化时(GTGG)不能酶切,而甲基化时(GCGG)酶切敏感;在变性高效液相色谱仪上甲基化片段和非甲基化片段能够完全分离;根据色谱峰面积可知两者的比例,在1.25％～100％范围内有良好的线性关系,重现性较好;对克隆测序样品进行限制性内切酶-变性高效液相色谱测定,结果与克隆测序一致. 结论:建立的限制性内切酶-变性高效液相色谱法能够定量测定SNCG基因CpG岛甲基化.
胃癌 液相色谱 克隆测序 肿瘤组织
周静 文贤子 邓大君
100036,北京大学临床肿瘤学院北京市肿瘤防治研究所病因研究室
国内会议
大连
中文
20-24
2007-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）