高拷贝数重组毕赤酵母的构建对人凝血因子VⅡ蛋白在毕赤酵母中表达的影响
目的：构建不同高拷贝数重组表达质粒并转入酵母，以比较研究人凝血因子vⅡ(FvⅡ)蛋白在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达时，表达单元拷贝数与表达量之间的关系。 方法：通过对单拷贝表达质粒进行改造，将表达单元(5”-AOX-FVⅡ-TT-3”)重复导入载体，构建2至5个表达单元串联的高拷贝重组菌体，探讨表达单元拷贝数与表达量之间的关系。并进行了15L发酵中试培养，比较不同拷贝数酵母在发酵罐培养中的表达情况。对发酵产物进行超滤浓缩，用一期法初步测定活性。 结果: 构建获得pPIC9K-FVⅡ表达单元串联的2至5个不同拷贝数的高拷贝重组酵母。摇瓶表达显示，随着拷贝数的增加，FvⅡ表达量呈抛物线状增加。在15L发酵罐中，5个拷贝数的重组体不如单拷贝重组体生长旺盛，并发生了溶菌现象。发酵产物经超滤脱盐浓缩后的活性测定表明表达的重组FVⅡ有生物活性，并且活性随蛋白浓度增高而呈递增趋势。 结论: 构建含高拷贝数表达质粒的工程菌可提高毕赤酵母FVⅡ表达量，此为获取低成本有活性的重组FVⅡ提供了一条新的途径。
人凝血因子VⅡ 高拷贝数 毕赤酵母 活性测定 一期法 生物制品
蔡蓓蓓 楼觉人 朱威
上海生物制品研究所,上海,200052
国内会议
北京
中文
259-262
2007-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）