会议专题

高拷贝数重组毕赤酵母的构建对人凝血因子VⅡ蛋白在毕赤酵母中表达的影响

目的:构建不同高拷贝数重组表达质粒并转入酵母,以比较研究人凝血因子vⅡ(FvⅡ)蛋白在毕赤酵母(Pichia pastoris)中表达时,表达单元拷贝数与表达量之间的关系。 方法:通过对单拷贝表达质粒进行改造,将表达单元(5”-AOX-FVⅡ-TT-3”)重复导入载体,构建2至5个表达单元串联的高拷贝重组菌体,探讨表达单元拷贝数与表达量之间的关系。并进行了15L发酵中试培养,比较不同拷贝数酵母在发酵罐培养中的表达情况。对发酵产物进行超滤浓缩,用一期法初步测定活性。 结果: 构建获得pPIC9K-FVⅡ表达单元串联的2至5个不同拷贝数的高拷贝重组酵母。摇瓶表达显示,随着拷贝数的增加,FvⅡ表达量呈抛物线状增加。在15L发酵罐中,5个拷贝数的重组体不如单拷贝重组体生长旺盛,并发生了溶菌现象。发酵产物经超滤脱盐浓缩后的活性测定表明表达的重组FVⅡ有生物活性,并且活性随蛋白浓度增高而呈递增趋势。 结论: 构建含高拷贝数表达质粒的工程菌可提高毕赤酵母FVⅡ表达量,此为获取低成本有活性的重组FVⅡ提供了一条新的途径。

人凝血因子VⅡ 高拷贝数 毕赤酵母 活性测定 一期法 生物制品

蔡蓓蓓 楼觉人 朱威

上海生物制品研究所,上海,200052

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第九次全国生物制品学术会议

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259-262

2007-10-01(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)