构建高拷贝数重组表达质粒在毕赤酵母高产量表达HBsAg中的应用
目的：通过构建高拷贝数表达质粒获得稳定高表达乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株。 方法：通过对单拷贝表达质粒进行改造，将表达盒(5”AOX-HBsAg-TT)重复导入载体，构建成高拷贝数表达质粒。通过电转化、15L规模发酵、纯化获得纯化HBsAg颗粒，经ELISA、Western blot、SDD-PAGE、电镜、免疫学试验等方法对表达产物的特异性、免疫原性及表达量与拷贝数间的关系进行了研究。 结果: 高拷贝数重组毕赤酵母的表达产物经ELISA、SDD-PAGE、Wetern blot等试验，显示出特异性，电镜观察证明表达产物能够自发装配成22nm类病毒颗粒(VLP)，其表达量与拷贝数呈正相关，拷贝数提高未对菌体正常生长带来影响，HBsAg制剂能有效刺激小鼠产生保护抗体。 结论: 构建含高拷贝数表达质粒的工程菌可显著提高毕赤酵母HBsAg表达星。此为获取低成本免疫用HBsAg提供了一条新的途径。
乙型肝炎 表面抗原 高拷贝数 毕赤酵母 重组表达 工程菌 免疫原性 生物制品
何成 蔡蓓蓓 楼觉人
上海生物制品研究所第二研究室,上海,200052
国内会议
北京
中文
366-370
2007-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）