人GAD65 DNA疫苗对NOD鼠糖尿病的预防作用及机制探讨
目的：探讨人GAD65 DNA疫苗对NOD小鼠糖尿病和胰岛炎的预防作用及其相关机制. 方法： (1)4周龄NOD雌鼠随机分为PBS(n=21)、PcDNA(n=20)、GAD65(n=21)三组.小鼠胫前肌分别注射PBS、质粒PcDNA3.1、人GAD65 DNA疫苗.注射量为50μg,一周后重复一次,两次共100μg.自10周龄开始,每周测尿糖一次.尿糖阳性后测血糖,连续2次血糖≥16.7mmol/L,即诊断为糖尿病,观察30周龄的累积发病率。(2)各组取12周龄未发病NOD鼠(n=10)胰腺做HE染色观察胰岛炎.(3)各组取12周龄的NOD鼠10只,处死后取脾制成脾细胞悬液行细胞培养72小时,ELISA法测定血清、脾细胞培养上清Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4水平；从脾脏内抽提总RNA后行RT-PCR半定量检测脾脏细胞因子IL-4、IFN-γ mRNA表达水平。(4)用RT-PCR方法来鉴定人谷氨酸脱羧酶在小鼠体内的表达. 结果： (1)30周龄时,PBS、PcDNA、GAD65三组累计发病率分别为95.2％、80.0％、61.9％。与PBS组比较,GAD65组发病率明显降低(P=0.008)；与PcDNA组比较,GAD65组发病率下降了18.1％(p=0.2)。(2)12周龄时GAD65组胰岛炎平均积分低于PBS组(P=0.001)和PcDNA组(P=0.027)。(3)GAD65组血清IL-4水平、脾脏IL-4 mRNA表达水平显著性高于PBS组和PcDNA组；(4)血清、脾上清IFN-γ水平及脾脏IFN-γmRNA表达水平三组间无显著性差异.(5)GAD65组血清、脾脏IL-4/IFN-γ比值水平高于PBS组与PcDNA组,但均无显著性差异.(6)小鼠肌肉内人GAD65基因表达在第1天时较弱,第4天时最明显,第7天时趋于减弱. 结论：运用基因克隆方法构建的携带人GAD65 DNA疫苗,能有效地在体内表达；并通过上调IL-4mRNA使Th2细胞因子IL-4水平上升,免疫反应向Th2偏移,致使NOD鼠胰岛炎减轻,在一定程度上预防NOD小鼠发生自身免疫性糖尿病.
DNA疫苗 胰岛炎 谷氨酸脱羧酶 1型糖尿病 非肥胖糖尿病 动物模型
罗建华 周智广 蒋铁建 裴剑浩 李霞 何凌 陈军 童敏
中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所,长沙,410011
国内会议
湖南张家界
中文
187-196
2004-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）