基于易错PCR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZ02的定向进化
利用易错PCR技术对短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)YZ02脂肪酶基因BpL进行两轮定向进化研究,分别获得最佳突变株；BpL1-7和BpL2-1369,其脂肪酶活力比出发酶分别提高了2倍和6倍.序列分析表明,突变体BpL2-1369有4个碱基发生了突变；T61CC147T/A334G/T371A,其中有3个碱基突变导致了氨基酸的改变.通过SWISS-MODEL数据库模拟脂肪酶的结构显示,3个突变氨基酸分别位于第1个α螺旋的第3个氨基酸、第4和第5个β折叠之间的转角以及第5个β折叠的第1个氨基酸位置。将野生型脂肪酶基因BpL和进化后的基因BpL2-1369的高效表达产物经Ni-Agarose柱和Sephadox-G75纯化后,酶学性质测定表明；突变脂肪酶的比活力比野生型脂肪酶提高了1.31倍,Km值由8.24mmol/L降低至7.17mmol/L；在pH＞8.0时的稳定性较野生型脂肪酶有所提高。
芽胞杆菌 脂肪酶 定向进化 PCR技术
闫云君 蔡勇 杨江科
华中科技大学生命科学与技术学院,武汉市,430074
国内会议
武汉
中文
456-463
2007-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）