检测致病性嗜水气单胞菌的双重Real-Time PCR方法的建立
气溶素(Aer)基因和丝氨酸蛋白酶(Ahp)基因是嗜水气单胞菌重要的毒力基因,根据GenBank中公布的Aer和Ahp基因的保守序列,按照多联PCR和real-timePCR引物的要求设计合成了2对引物,建立了基于SYBR GreenⅠ模式的双重real-timePCR方法,用于致病性嗜水气单胞菌的快速检测。结果表明:扩增出的两个目的基因片段与预期大小吻合,测序结果也证实为Aer基因和Ahp基因的特异性片段；该方法特异性好,只对目的基因有扩增,对其它无关细菌核酸无特异性扩增；扩增效率为95.3％；组内的变异系数为0.4～2.5％；组间的变异系数为0.8～5.0％；最低可检测57个拷贝的细菌DNA,在5.7×101～5.7×107拷贝范围内有很好的线性关系(r=0.998)；可在3h内完成样本检测；与普通PCR方法相比,灵敏度高出104倍.对22例临床疑似样本的检出率为20/22,高于普通PCR的17/22,也高于细菌分离的9/22.本方法的建立为致病性嗜水气单胞菌的快速诊断、大规模检疫、流行病学调查等提供了新的检测方法。
嗜水气单胞菌 毒力基因 快速检测 流行病学调查
王远微 汤承 于学辉 王英 岳华
西南民族大学生命科学与技术学院,四川,成都,610041
国内会议
江西井冈山
中文
1082-1087
2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）