腺病毒介导的GFP在鸭胚成纤维细胞中的表达及RNA干涉
原代细胞具备二倍体的遗传性、来源方便,可作为RNA干涉(RNAi)效果的体外评价系统,可方便地研究病毒与宿主相互作用机制及其基因功能,也可作为筛选有效的siRNA分子用于病毒感染防治的平台。本研究将不同感染复数(MOI)的绿荧光蛋白重组腺病毒(Adv-GFP)感染鸭胚成纤维细胞(DEF),用流式细胞仪分别测定感染后24、36、48和60h GFP表达效率及对细胞的影响；此外,用脂质体转染试剂将化学合成的靶向GFP基因的小干扰RNA(GFP-siRNA)转染DEF,6h后再感染200 MOI的Adv-GFP.结果显示:10～200 MOIAdv-GFP均能够感染DEF并表迭GFP,且对DEF的形态及活力无明显影响,GFP的表达率为5.4±0.29～31.2±3.11％,500 MOIAdv-GFP则对DEF有显著的致细胞病变作用；GFP-siRNA能显著干涉Adv-GFP介导的GFP基因在DEF中的表达,相对抑制率为98.56％。证明DEF细胞与其它真核生物一样存在RNA干涉机制,Adv-GFP在一定的MOI范围内对DEF是安全的,且转染效率较高,是理想的外源基因表迭载体；本研究为RNA干涉技术研究DEF易感病毒和鸭的基因组功能以及病毒感染防治奠定了基础。
鸭胚成纤维细胞 腺病毒载体 绿荧光蛋白 感染复数
孟宇航 汤承 杨发龙 邓书 岳华
西南民族大学生命科学与技术学院,四川成都,610041
国内会议
江西井冈山
中文
752-756
2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）