血清7型胸膜肺炎放线杆菌apxⅡC/apxⅠA+基因缺失重组菌株的构建与鉴定

摘要：

通过接合转移和SacB负向筛选的方法,我们构建了一株apxⅡC缺失的血清7型胸膜肺炎放线杆菌重组菌株.首先构建重组转移质粒pEHA1.将pEHA1转化供体大肠杆菌β2155,并将其与野生型APP血清7型亲本菌混合培养5小时,然后涂到含霉素抗性的培养基上培养,挑取阳性克隆,接种到无抗性液体培养基,培养后涂于含有蔗糖的的培养基,培养一定时间后挑取蔗糖抗性的克隆,即可得到目的突变株.通过PCR、遗传稳定性、外毒素分泌、重组位点。序列分析验证了重组菌构建成功.我们对重组菌生物学特性进行了初步研究,发现其增殖能力未受影响,对小鼠毒力显著降低.该突变株构建体系的建立为猪传染性胸膜肺炎减毒活疫苗的开发以及对胸膜肺炎放线杆菌特定基因的功能研究奠定了良好基础。

关键词： 猪传染性胸膜肺炎 胸膜肺炎放线杆菌 接合转移 负向筛选 重组菌株 生物学特性

作者: 刘金林 林荔雯 贝为成 陈焕春

作者单位: 华中农业大学动物医学院动物传染病研究室,武汉,湖北,430070 华中农业大学动物医学院动物传染病研究室,武汉,湖北,430070;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室动物病原分室,武汉,湖北,430070

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会

会议地点: 江西井冈山

会议语种:中文

页码: 502-506

在线出版日期: 2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）