伪狂犬病毒Ea株UL18基因的克隆、序列分析及表达
本研究以伪狂犬病毒Ea株基因组DNA为模板,通过PCR扩增含UL18全长基因,将PCR产物克隆于PMD18-T载体,并采用双脱氧终止法进行序列测定。序列分析显示UL18全长891bp,可编码297个氨基酸.将该基因亚克隆到原核表达载体pQE-82L的6×His下游、获得原核表达质粒pQE-82L-UL18,转化大肠杆菌DH5α,经IPTG诱导在大肠杆菌中成功表达获得分子量约33kD的融合表达蛋白6×His-UL18,Western-blot试验证实表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。进一步将UL18基因插入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP基因的5”端,获得与EGFP融合表达的真核表达质粒pEGFP-UL18,转染Hela细胞,通过激光共聚焦显微镜观察发现转染后24h融合蛋白EGFP-UL18主要定位在细胞浆,仅有部分定位于细胞核,而48h则主要定位在细胞核.本研究为进一步研究伪狂犬病毒UL18基因的结构和功能奠定了基础。
伪狂犬病毒 UL18基因 序列分析 基因表达 基因克隆
薛念波 肖少波 江云波 金黎亮 常天明 陈焕春 方六荣
华中农业大学农业微生物学国家重点实验室,华中农业大学动物医学院动物病毒室,湖北省武汉市,430070
国内会议
江西井冈山
中文
340-344
2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）