鹅源副粘病毒NA-Ⅰ株M基因真核表达载体的构建及鉴定
将鹅源副粘病毒NA-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集36～72h死亡的鸡胚尿囊液.参考已发表的鹅源副粘病毒M基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增鹅源副粘病毒NA-1株M基因,预期扩增的M基因片段包含完整的开放阅读框.通过RT-PCR扩增出鹅源副粘病毒NA-1株M基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到M基因片段,经EcoRⅠ,SalⅠ消化。将M基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DH5α,挑选菌落,经限制性核酸内切酶Sal Ⅰ和EcoRⅠ双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-M构建成功,通过用脂质体转染哺乳动物细胞Vero细胞,用300 μg/mlG418筛选4周,用间接免疫荧光实验证明M蛋白在细胞中表达,为下一步研究M基因功能奠定了基础。扩增的M基因测序后,与其他禽副粘病毒Ⅰ型M基因进行了核苷酸、氨基酸序列,系统发育树的分析比较,为阐明鹅源副粘病毒NA-1株的遗传背景奠定了基础。
鹅副粘病毒 基因克隆 重组质粒 真核表达载体
马爱霞 丁壮 宋子运 徐明 宣华
吉林大学预防兽医学国家重点学科,动物重要病原与疫病研究室,吉林长春,130062
国内会议
江西井冈山
中文
669-672
2007-09-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）