质粒载体介导RNA干扰沉默LMP-1基因抑致鼻咽癌细胞转移
目的:探讨应用DNA载体介导RNA干扰技术,抑制鼻咽癌细胞中EB病毒(Epstein-Barr virus)潜伏膜蛋白1(latent membrane protein-1,LMP-1)表达的可能性,并观察LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响. 方法:设计合成针对EB病毒LMP-1基因的短链干扰RNA(small hairpin RNA,siRNA),利用脂质体转染导入EB病毒(+)的鼻咽癌细胞C611,用半定量RT-PCR检测LMP-1 mRNA水平的变化,筛选出能有效抑制LMP-1表达的siRNA序列筛选出最佳RNA干扰序列.根据此序列合成能转录出干扰RNA的DNA模板插入pAVU6+27质粒,构建能够介导RNA干扰的发夹状干扰RNA(small hairpin RNA,shRNA)DNA表达载体.采用磷酸钙共沉淀法将质粒导入C611细胞,G418筛选找到LMP-1基因沉默的亚克隆C611L,通过胰酶消化后细胞脱落时间,观察贴壁生长能力的变化,肿瘤细胞穿膜实验分析细胞基底膜穿透能力与对照组的差异,采用划痕时间观察细胞移动能力的改变,以检测LMP-1基因沉默对鼻咽癌细胞转移能力的影响. 结果:导入有效干扰siRNA后,C611细胞中LMP-1 mRNA水平下降90％以上.在shRNA表达载体有效转染的C611细胞中,也能对LMP-1基因的表达产生稳定的抑制.肿瘤细胞转移实验表明,LMP-1基因沉默的C611L细胞在胰酶消化后,脱落时间延长;相同时间内穿过人工基底膜的和移动到划痕生长的细胞数量较对照组减少.说明C611L细胞贴壁生长能力提高,基底膜穿透能力和细胞移动能力下降. 结论:RNA干扰能够有效抑制EB病毒LMP-1基因在鼻咽癌细胞中的表达.shRNA表达载体能够在鼻咽癌细胞内介导RNA干扰,并获得对LMP-1基因稳定的抑制.LMP-1基因可能通过贴壁生长能力,基底膜穿透能力和细胞移动能力等不同方面影响鼻咽癌细胞的转移.
鼻咽癌 细胞转移 RNA干扰 LMP-1 基因沉默
李刚 李湘平 刘雄
南方医科大学附属南方医院耳鼻咽喉科,510515,广州
国内会议
南宁
中文
95-102
2007-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）