人生长分化因子5成熟肽基因克隆和表达的初步研究
目的:利用基因工程技术在大肠杆菌中表达人生长分化因子-5(human growth and differentiation factor 5,hGDF-5)成熟肽.方法:根据Genbank中hGDF-5的序列化学合成两条引物,从人胎儿软骨组织提取总RNA,通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)得到hGDF-5完整成熟肽基因.将所得基因片段插入表达载体pET22b(+),提取重组质粒,酶切鉴定并测序,转化大肠杆菌BL-21进行IPTG诱导表达.结果:DNA琼脂糖凝胶电泳显示:RT-PCR产物为一长约350bp的带,阳性克隆质粒经双酶切可切出约350bp的片段.DNA测序表明与Genbank中的序列完全一致.诱导表达后SDS-PAGE电泳显示在14KD处有一明显的外源蛋白表达条带.结论:通过反转录聚合酶链式反应从人胎儿软骨组织中成功克隆出人GDF-5完整成熟肽基因,基因序列完全正确,并在大肠杆菌中得到高效表达.
生长分化因子 基因表达 成熟肽 基因克隆
王万山 顾为望 朴英杰
南方医科大学实验动物中心,广东,广州,510515 南方医科大学中心实验室,广东,广州,510515
国内会议
郑州
中文
314-318
2006-10-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）