碱裂解法大量提取纯化质粒DNA的研究
(0) 研究目的和意义:质粒DNA是基因工程的主要载体，可以携带外源基因进入细菌、动物细胞或植物体内进行扩增与表达。质拉DNA的分离提取是基因工程中经常性的最基本的工作.本次实验的目的是在实验室条件下建立质粒大量提取的优化方案。 结果和结论:(1)在本实验室条件下，用碱裂解法提取质粒是最理想的方法，在粗提前期加入RNaseA能够充分消化RNA,缩短操作时间，简化操作步骤，在纯化时加入LiCI能够有效去除大分子RNA和蛋白质，达到进一步纯化目的。(2)在对质粒纯化时，采用了酚/仿抽提，反复离心纯化，PEG8000沉淀纯化凝层析纯化四个方案，凝胶层析以其高得率(浓度达到543”g/ml)，无RNA与蛋白质污染(OD260/280值达到1.79)，低内毒素污染的显著优势，成为最优方案.(3)在质拉粗提中，加入氛霉素的效果不显著，加入溶菌酶效果明显，能够有效提高质粒的浓度与纯度(其中纯度提高了3.5，浓度提高了2.8).(4)溶于TE缓冲液的质粒DNA可在40C短时间保沪存，并可在-20℃或-80℃长时间保存，至于ddH20，除非提取出的质粒马上使用，否则不建议用ddH20保存质粒。综上所述，在本实验室条件下，使用碱裂解法粗提质粒，提取时加入溶菌酶处理菌液，然后采用凝胶层析纯化质粒，将得到令人满意的质粒DNA。以TE( PH8.0)保存质粒于－20℃或－800℃，一个月内，质粒损失不超过8％。
碱裂解法 质粒DNA 分离提取
覃绮丽 杨素芳 崔奎青 张新明 谢体三 石德解
广西大学动物繁殖研究所,广西,南宁,530005
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2006-07-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）