重组大肠杆菌生产肝素酶的培养基优化及酶活快速监测新方法研究
肝素酶Ⅰ是降解大分子肝素制备低分子量肝素(Low molecular weight heparin，LMWH)的重要生物催化剂。本研究采用大肠杆菌重组表达肝素酶Ⅰ的策略，成功地构建了由肝素酶Ⅰ（hepA）和麦芽糖结合蛋白(MBP)融合的表达体系（pMHS）。结果表明，MBP 的融合极大地提高了肝素酶Ⅰ的可溶性表达。以M9 培养基为基础进一步对培养基组成进行了优化，获得了酶活高达15928IU/L，比酶活为10.340IU/mg 总蛋白的培养结果。为实现适于酶生产及其应用过程控制和优化的酶活的快速监测技术，通过构建绿色荧光蛋白GFP与肝素酶I（hepA）融合表达体系（pGFP-hepA），研究了利用绿色荧光蛋白GFP 构建快速定量肝素酶活方法的可行性。结果表明，GFP 的融合也可以提高肝素酶I 的可溶性表达，其荧光量与肝素酶活之间具有良好的线性关系。
肝素酶I 麦芽糖结合蛋白 绿色荧光蛋白 可溶表达 酶工程 重组大肠杆菌
叶逢春 陈银 况莹 邢新会
清华大学化工系生物化工研究所
国内会议
北京
中文
2005-10-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）