重组人骨形态形成蛋白4基因腺相关病毒载体的构建

摘要：

目的 构建重组人骨形态形成蛋白 4 基因腺相关病毒载体。 方法 根据hBMP4 的基因序列设计引物，上游引入 EcoR I 位点，下游引入 Sal I 位点，以 EX-A0242-M01－hBMP4 为模板扩增目的基因。将 hBMP4 基因克隆入 pUC18 载体中，获得重组质粒pUC18-BMP4。然后用 EcoRI+Sal I 酶切 pUC18-BMP4 及质粒 pSNAV，回收酶切片段，T4连接酶 16oc 过夜，转化大肠杆菌 DH5α感受肽细胞，筛选阳性克隆获得 pSNAV-hBMP4，EcoRI+SalI 双酶切鉴定，并行全基因测序。转染 BHK21 细胞， G418 筛选培养，获得抗药克隆细胞株。HSV1-rc/△UL2 感染，包装此细胞株并收获病毒载体 AAV-hBMP4。行 DNA点杂交法测定病毒滴度，SDS-PAGEF 分析判断病毒纯度。 结果 PCR 电泳及酶切鉴定表明 pSNAV-hBMP4 重组成功，基因测序显示装入 PSNAV 质粒中的 hBMP4 基因正确；AAV-hBMP4 病毒的大致滴度为 1.5×1012vg/ml，分泌蛋白浓度约为 0.124mg/ml，病毒载体的纯度在 95﹪以上。 结论 本实验获得的病毒载体滴度高、感染性好，完全可以满足骨组织工程的需要。

关键词： 骨形态形成蛋白 腺相关病毒 骨组织工程 全基因测序 基因转染

作者: 郑召民 董智勇 邝冠明 廖威明 李佛保

作者单位: 中山大学附属第一医院骨科,广州,510080

会议类型: 国内会议

会议名称: 2005年全国骨科修复与移植技术学术研讨会暨中国医药生物技术协会骨组织库分会成立大会

会议地点: 北京

会议语种:中文

在线出版日期: 2005-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）