中国白兔白介素-15基因的克隆、序列分析及其在E.coli中的表达
运用RT-PCR技术对用ConA刺激的中国白兔外周血淋巴细胞(PMBCr)进行了扩增,将纯化后的PCR产物克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定,并与不同物种的IL-15基因进行了序列比较.结果该基因全长489 bp,编码162个氨基酸,其中前29个氨基酸残基构成信号肽序列.与不同物种IL-15基因相比,核苷酸和推导的氨基酸序列有一定的差异.在推导的中国白兔IL-15氨基酸序列中,在108-110、119-121、127-129和143-146位存在4个潜在的N-联糖基化位点,同时存在6个Cys残基.将pTIL-15双酶切,回收目的基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG进行了诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到相对分子量为20.5ku的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的13.6％.
白介素-15基因 序列分析 大肠杆菌表达 外周血淋巴细胞 IL-15基因 蛋白表达 IPTG诱导
乔军 孟庆玲 才学鹏 景志忠 张艳 田广孚 郭爱疆
中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室,甘肃,兰州,730046;甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070
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2006-04-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）