会议专题

大肠杆菌O157:H7 eaeA基因的基因克隆及原核表达

采用自行设计的引物、应用PCR的方法直接从广东分离株大肠杆菌O157:H7 021210的基因组中扩增出eaeA基因的完整阅读框(ORF),得到了一条大小约为2800bp的特异条带.T-A克隆后将其亚克隆至原核表达载体pET-28a(+),经PCR鉴定、酶切鉴定及核苷酸序列测定,证实成功构建原核重组表达质粒pET-eaeA,然后转化E.coli BL21(DE3)pLysS,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测.用所获得的重组融合蛋白的初步纯化产物经三次免疫新西兰兔,制得多克隆抗血清,并用琼脂扩散试验多克隆抗血清进行了证明.本试验成功的原核表达、初步纯化了pET-eaeA融合蛋白,并制得了多克隆抗血清,为下一阶段该重组蛋白生物学性质、免疫学特性研究及其应用的研究打下了坚实的基础.

大肠杆菌 eaeA基因 紧密粘附素 基因克隆 原核表达 PCR方法

龚霞 郭霄峰

华南农业大学兽医学院,广州,510640

国内会议

中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2006年学术年会

广州

中文

461-464

2006-11-24(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)