重组HIV-1核衣壳蛋白的表达纯化及其体外抑制剂筛选方法的建立
在抗HIV治疗中,逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和进入抑制剂的使用提高了艾滋病患者的存活率。NCp7含有两个高度保守的CCHC型锌指结构(Cys-X2-Cys-X4-His- X4-Cys),锌指结构中氨基酸的突变或功能受抑制将导致HIV感染能力急剧下降.NCp7抑制剂可能是下一代有效而不容易产生耐药性的抗HIV药物,是一个很有前景的治疗靶点。本文研究了从pBRU2/ADP202质粒经PCR扩增得到HIV-1 NCp7编码序列,克隆到pet28a 质粒中构建HIV-1 NCp7表达载体。阳性克隆转染E. coli BL21 DE3,以IPTG诱导表达,细胞裂解液经Q sepherose H.P.纯化后超滤更换缓冲体系,再经SP sephrose H.P.纯化后纯度达到90％以上。将具有锌离子逐出活性的H2O2和AT-2与NCp7作用,用锌离子特异荧光染料TSQ ”N-(6-methoxy-8- quinolyl)-p-toluenesulfonamide, N-(6-甲氧基-8-喹啉基)-p-甲基磺酰胺”检测化合物的锌离子逐出活性,结果表明该方法可以用于NCp7抑制剂的筛选。经该方法筛选检测,KIZ-CM 10,18,19等化合物具有一定的锌离子逐出活性,值得进行深入研究。
艾滋病 表达纯化 抑制剂 筛选方法
王云华 王睿睿 杨柳萌 李健峰 徐维明 郑永唐
中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室,云南,昆明,650223;中国科学院研究生院,北京,100039 中国科学院昆明动物研究所动物模型和人类疾病机理重点实验室分子免疫药理学实验室,云南,昆明,650223 中国医学科学院医学生物学研究所,云南,昆明,650231
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2006-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）