抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定
目的:制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(human carboxylesterases-Ⅱ, hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定.方法:以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb.用间接ELISA法测定mAb效价、Western blot鉴定抗体特异性、免疫组化染色法对抗体相应的抗原进行组织定位.用免疫沉淀及基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptide mass fingerprint,PMF),搜索数据库鉴定mAb对应的抗原.结果: 获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系.杂交瘤细胞分泌的mAb Ig亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7.Western blot分析显示,在Mr为62 000处有1条清晰的条带.免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内蛋白结合.该mAb免疫沉淀物的Mr为62 000,与hCE-Ⅱ的Mr相符.对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ.结论: 制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具.
人羧酸酯酶-Ⅱ 单克隆抗体 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱
武正华 唐晓波 王志刚 纪宏宇 于磊 刘慧文 朱大岭
哈尔滨医科大学,药学院生物制药教研室,黑龙江,哈尔滨,150086 哈尔滨医科大学,药学院生物制药教研室,黑龙江,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150086 哈尔滨医科大学,附属二院药学部,黑龙江,哈尔滨,150086 哈尔滨医科大学,基础医学院组胚教研室,黑龙江,哈尔滨,150086 哈尔滨医科大学,药学院生物制药教研室,黑龙江,哈尔滨,150086;哈尔滨医科大学,附属二院药学部,黑龙江,哈尔滨,150086;黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地;哈尔滨
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2006-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）