龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶米氏常数及最大反应速率影响
目的:探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响.方法:采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax.结果:酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为2.37×10-3±8.37×10-5 mM,9.16×10-4±7.54×10-5 nmol/106 cells,龙葵碱组的Km和Vmax分别为2.22×10-3±9.05×10-5 mM 和 5.14×10-4±3.72×10-5 nmol/106 cells.对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为8.95×10-3±2.61×10-4 mM,2.55×10-6±1.92×10-8 nmol/min·mg protein,龙葵碱组的Km和Vmax分别为9.48×10-3±3.63×10-4 mM和 2.43×10-6±1.32×10-8 nmol/min/mg protein,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p＜0.001,细胞质p＜0.05);结论:龙葵碱是NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂.
龙葵碱 人肝癌细胞 高效液相色谱 反应速率 酶动力学 非竞争性抑制剂
高世勇 季宇彬 邹翔 万梅绪 张宇金
哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨,150076
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2006-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）