莱菔籽芥子碱延缓GSNO诱导胸腺细胞凋亡的作用
目的:通过研究莱菔籽芥子碱延缓GSNO诱导的胸腺细胞凋亡作用来洞察理气中药调节的整体作用.方法与结果:将純化出莱菔子生物碱用薄层层析,高效液相层析和NMR鉴定为芥子碱(Sinapine of Raphanvs sativus semen,SRS).用高性能细胞分选流式细胞仪、电镜和DNA 琼脂糖电泳从形态、生化和凋亡率三方面都证明SRS可缓慢地部分延缓胸腺细胞凋亡,并在近场光学扫描显微镜(near-field scanning optical microscopy, NSOM)的荧光及形貌图像上得到证实.在此基础上,着重用双光子激光扫描技术在excitation/emission: 730/460nm波长下测试 LysoSensor Yellow/Blue DND -160(L-7545)标记的胸腺细胞溶酶体.用CAS、B2A和Origin 6.0软件依序将PIC图像转换为BMP文件和单细胞荧光强度转化为数据,并显示单个细胞荧光强度值.未处理胸腺细胞溶酶体的荧光强度在正常范围内,dexamethasone(Dex)和GSNO 处理的细胞荧光强度显著增加,这意味着溶酶体在pH 3.5-6.5内酸化,同时凋亡率增加.而GSNO-L-NMMA(一氧化氮合酶抑制剂)及GSNO-SRS 共同调节的溶酶体使之荧光强度下降,这标志着在pH 3.5～6.5范围内酸化减弱.同时凋亡被轻微抑制.讨论:从SRS和GSNO 共同处理胸腺细胞的TEM、NSOM图都孕育着SRS 可缓慢地部分关闭GSNO启动的细胞凋亡.ICCD实时荧光显微图像已证明,GSNO从开始处理胸腺细胞到120分时可使标志细胞凋亡的荧光强度增加,SRS能缓慢地使荧光强度减弱.由此进一步论证TEM和NSOM对SRS可部分关闭GSNO启动的凋亡的观点.Dex和GSNO有不同的靶分子、信号转导通路和通过不同的基因表达调控细胞程序死亡.Dex靶分子可作为转导因子的受体,和T-淋巴细胞受体协同调节.Dex所启动的T细胞死亡是与其死亡基因8表达相关.NO与巯基反应通过亚硝酰化生成S-亚硝基硫醇进行的信号转导,可激活p53基因网络导致细胞凋亡.我们的研究表明,GSNO通过上调p53表达诱导的胸腺细胞凋亡.p53 基因和蛋白与Akt的”对话” 所构建的基因网络是调节凋亡开关的核心,干扰基因网络的变动决定着细胞的存亡.各种凋亡参数的阈值在决定开关中也起重要作用.不同激活因子诱导胸腺细胞凋亡的过程其溶酶体酸化程度不同.据此提示质子在凋亡过程中的信号传导作用及胸腺细胞具有不均一性和分隔性.
莱菔子 芥子碱 胸腺细胞 一氧化氮 质子信号转导 细胞凋亡
段绍瑾 张泽渤 顾丽贞 张春阳 陈宇霞 谢爱芳 安荣姝 解荣庆 吕文琦 徐惠
中国中医科学院广安门医院,北京,100053,中国 中国科学院物理研究所光学研究室,北京,100080 清华大学理学院物理系单原子单分子纳米教育部重点实验室,北京,100084 中日友好医院,北京,100029 中国科学院研究生院化学部,100039
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2006-11-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）