猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化
目的:构建猪β2-微球蛋白(Sβ2m)基因的原核表达载体,使其能在大肠杆菌中得到高效表达并能纯化,为构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.方法:采用RT-PCR技术从猪外周血单核细胞(PBMC)中扩增出去信号肽的S2m基因,克隆至pET-28a(+)高效表达载体后进行化学诱导表达,利用Ni2+NTA鏊合物树脂柱对表达产物进行了纯化,用SDS-PAGE和Western blotting法对表达产物进行鉴定.结果:成功构建了pET-Sβ2m表达载体,表达产物以包涵体的形式存在,分别占全菌和不溶性蛋白的40.4％和91.7％,并在变性条件下对包涵体中的重组Sβ2m进行了纯化,获得了高纯度的Sβ2m,结论:成功表达、纯化了Sβ2m,为进一步利用亲和素在体外构建猪MHC-Ⅰ类分子肽四聚体奠定基础.
猪 β2微球蛋白基因 大肠埃希氏菌 原核表达载体 纯化工艺
肖一红 刘光亮 童铁钢 王群 孟庆文 吴东来
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨,150001;中国农业科学院研究生院,北京,100081
国内会议
中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术会议
乌鲁木齐·石河子
中文
176-179
2006-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）