TaqMan荧光定量RT-PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

摘要：

PRRSV的快速检测方法虽然很多,但实际生产和科研需要对其进行快速定量检测.本研究建立了PRRSV的TaqMan荧光定量RT-PCR技术.首先根据GenBank上登陆的PRRSV保守基因序列设计合成引物和探针,并进行筛选。然后对荧光定量PCR反应条件进行优化并获得标准曲线,同时用该方法对送检组织病料进行检测,并与常规RT-PCR进行对比.结果表明,所建立的荧光定量RT-PCR检测灵敏度可达5.0×100拷贝/μL,比常规RT-PCR灵敏度高100倍。用该方法对东莞、湛江、增城等地的猪血清、多种组织样品进行荧光定量PCR检测,结果该方法与常规RT-PCR阳性符合率为100％。用该方法对三份不同的组织样品进行重复检测,计算得到平均循环阈值的标准差分别为0.14、0.14和0.44,变异系数分别为0.01％、0.01％和0.02％,说明该方法具有良好的重复性,可满足当前PRRS的诊断需求。应用说明，该方法可对模板进行准确定量,可用于该病致病机理,疫苗研制等方面的研究.

关键词： 猪繁殖 病毒病 呼吸综合症 荧光探针 病毒检测 荧光定量检测

作者: 宋志军 宋长绪 杨增岐 朱道中 武占银 蒋智勇 林志雄 刘燕玲 张福良

作者单位: 西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100;广东省农科院兽医研究所,广东,广州,510640 广东省农科院兽医研究所,广东,广州,510640 西北农林科技大学动物科技学院,陕西,杨凌,712100 广州出入境检验检疫局,广东,广州,510623 宁夏动物防疫站,宁夏,银川,750002

会议类型: 国内会议

会议名称: 中国畜牧兽医学会养猪分会2006年学术年会暨第四次全国会员代表大会

会议地点: 天津

会议语种:中文

页码: 417-421

在线出版日期: 2006-08-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）