尼帕病毒TaqMan荧光RT-PCR检测方法的建立

目的:建立对我国构成严重威胁的尼帕病毒(Nipah virus,NiV)的TaqMan荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测方法.方法:根据NiV N基因序列设计并合成两套引物、探针及阳性对照的序列,分别对应两套TaqMan检测体系;将阳性对照序列克隆到质粒PMD-18上,再用含有T7启动子的两条引物扩增,扩增产物纯化后进行体外转录,以转录的dsRNA为阳性对照,用RNA酶消化等方法检测其稳定性;以倍比稀释的NiV的cDNA、阳性对照和一些阴性对照为模板,检验此两套检测体系以及文献报道的普通RT-PCR的灵敏度和特异性.结果:第一套TaqMan实时荧光RT-PCR最为灵敏,能够检测到600拷贝的RNA模板,并且特异性很强;此dsRNA阳性对照性质稳定,能够排除阳性对照的核酸污染引起的假阳性.结论:建立的尼帕病毒荧光RT-PCR方法检测方法灵敏且特异,其阳性对照克服了此类试剂中RNA对照容易降解以及难以排除其核酸污染引起的假阳性等缺点.
尼帕病毒 逆转录聚合酶链反应 阳性对照 荧光RT-PCR检测
郭丽霞 陈继明 孙承英 王志亮
中国动物卫生与流行病学中心/国家外来动物疫病诊断中心,青岛,266032
国内会议
北京
中文
615-619
2006-10-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)