东亚钳蝎镇痛活性肽SAPⅢ的分离纯化、基因克隆与功能表达
目的:东亚钳蝎作为传统中药,镇痛功效显著.我们对东亚钳蝎蝎毒进行分离纯化和镇痛活性追踪,获得单组分镇痛活性多肽.对其进行结构解析,基因克隆,并应用原核表达技术进行功能表达.为镇痛的分子生物学机制研究和效果的进一步评价提供了足够样品.方法 利用现代分离纯化技术,从蝎毒中分离纯化出单组分镇痛活性多肽SAPⅢ;利用巢式PCR技术从蝎尾cDNA中克隆出SAPⅢ的基因;将其重组到本室构建的可溶性表达载体pSYPU上,在原核宿主BL21(DE3)中进行可溶性表达;通过一步亲合层析,从菌体总蛋白中纯化出重组SAPⅢ.用小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法考查SAPⅢ的镇痛活性.结果 经过镇痛活性跟踪的5步层析过程,纯化出单组分镇痛活性多肽SAPⅢ;Edman降解法得到其N-端17个氨基酸序列,据此克隆出基因,重组并进行可溶性表达,表达产物占菌体总蛋白的25％以上.通过一步亲和层析,目的 蛋白纯度达到85％,每升菌体发酵液可得到4.0 mg产物.在小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法实验中,给药剂量为5.0 mg/Kg时,疼痛抑制率达到60％.结论 我们发现并成功制备了镇痛活性肽SAPⅢ,为活性多肽的寻找和制备提供了一条思路.
东亚钳蝎 活性肽 镇痛 分离纯化 基因克隆 功能表达
邵建华 惠长野 蔡启峰 吴小燕 顾兰兰 吴春福 张景海
沈阳药科大学制药工程学院 沈阳药科大学药学院,辽宁,沈阳,110016
国内会议
石家庄
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202-206
2006-04-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）