重组酪氨酸酚裂解酶的表达、纯化与酶学性质
以PCR方法扩增得到弗氏柠檬酸细菌(Citrobacter freundii)ATCC 8090中酪氨破酚裂解酶的结构基因tpl,与带强启动子T5的表达载体pQE30T连接后构建质粒pQTTPL,并转化到E.coli M15中进行表达,所表达的酶经镍亲和柱HiTrap、Sephadex G-75凝胶过滤、凝血酶切除组氨酸标签后再通过镍亲和柱HiTrap三步纯化后,得到SDS-PAGE单一谱带的纯酶,比酶活3.32U/mg,该酶最适pH 7.8,最适温度30℃,在40℃以下和pH7.0-8.4之间保持较好的稳定性,Fe2+、Mg2+对酶有明显的激活作用,Ba2+、Pb2+、Mn2+、Ni2+、Sn2+、Co3+、Cu2+对酶活有不同程度的抑制作用.而K+和Ca2+的作用可以忽略不计,以L-酪氨酸为底物时,该酶的Km和为Vmax分别为0.25 mmol/L和2.39μmol/(mg·min)。
裂解酶 酪氨酸酚裂解酶 柠檬酸 酶学性质
时优 王树英 段作营 李华钟
江南大学教育部工业生物技术重点实验室 江南大学分析测试中心 江南大学教育部工业生物技术重点实验室;江南大学医学系,江苏无锡,214036
国内会议
江苏无锡
中文
553-559
2006-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）