假单胞菌DLL-E4尿黑酸降解基因的克隆与功能的初步分析
通过接合转移将质粒pSC123上的转座子Tn5随机插入到DLL-E4基因组DNA中,从大约8,000个突变子中筛选到1株在LB培养基上积累红褐色物质的突变株M18,该突变株不能以L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine,Phe)为唯一碳源生长.SEFA-PCR扩增转座子侧翼序列发现其与已报道的尿黑酸1,2-双加氧酶基因hmgA的同源性为92％.将hmgA定向克隆至表达载体pET-29a中,转化至Escherichia coli BL21,经IPTG诱导后可表达分子量约为48kD的蛋白;诱导后转化子粗酶液对尿黑酸有很好的降解效果.将hmgA连入自杀性载体pEX19Gm,通过同源重组整合至M18染色体中,使其恢复了DLL-E4利用Phe的能力,证实了HmgA是尿黑酸苯环裂解酶.
转座子标签法 同源重组 基因敲入 单胞菌 尿黑酸 克隆
邓海华 曹慧 李晓丹 王世明 崔中利 李顺鹏
南京农业大学生命科学学院微生物学系,农业部农业环境微生物工程重点开放实验室,南京,210095
国内会议
江苏无锡
中文
222-228
2006-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）